Fluorescenční rezonanční přenos energie (FRET)
Fluorescenční rezonanční přenos energie (FRET) je proces neradiačního přenosu energie, při kterém se energie donorového excitovaného stavu přenáší do akceptorového excitovaného stavu prostřednictvím interakce mezimolekulárních elektrických párů.Tento proces nezahrnuje fotony, a proto není radiační.Tento test má výhody v tom, že je rychlý, citlivý a jednoduchý.
Barvivo použité ve FRET testu může být identické.Ale ve většině aplikací se ve skutečnosti používají různá barviva.Stručně řečeno, přenos světelné rezonanční energie je přenos dvojice dipólů z donoru (barvivo 1) na akceptor (barvivo 2), když je donorová skupina excitována.Obecně se emisní spektrum donorové fluoroforové skupiny překrývá s absorpčním spektrem akceptorové skupiny."Když je vzdálenost mezi dvěma fluorofory vhodná (10 - 100 A), lze pozorovat přenos energie fluoroforu z dárce na akceptor."Způsob přenosu energie závisí na chemické struktuře receptoru:
1. Převádí se na molekulární vibrace, to znamená, že světelné světlo přenosu energie mizí.(Receptor je zhášeč světla)
2. Emise je intenzivnější než samotný receptor, což má za následek červený posun v sekundárním fluorescenčním spektru.“(Receptory jsou světelné zářiče).
Donorová skupina (EDANS) a akceptorový gen (DABCYL) jsou jednotně spojeny s přirozeným substrátem HIV proteázy, a když substrát není odpojen, DABCYL může potlačit EDANS a pak se stane nedetekovatelným pro fluor.Po odpojení proteázy HIV-1 již není EDANS zhášen pomocí DABCYL a následně lze detekovat luciferázy EDANS.Dostupnost inhibitorů proteáz lze monitorovat změnami intenzity fluorescence EDANS.
FRET peptidy jsou vhodné nástroje pro studium peptidázové nespecifity.Protože jeho reakční proces může být nepřetržitě monitorován, poskytuje pohodlnou metodu pro detekci enzymové aktivity.Lesk produkovaný po hydrolýze peptidových vazeb donorem/akceptorem poskytuje míru aktivity enzymu v nanomolárních koncentracích.Když je FRET peptid neporušený, vykazuje náhlé vymizení vnitřního záblesku, ale když se jakákoliv peptidová vazba naproti donoru/akceptoru přeruší, uvolní záblesk, který lze nepřetržitě detekovat a aktivitu enzymu pak lze kvantifikovat.
Čas odeslání: 14. srpna 2023