Rekombinantní proteinové antigeny mají často několik různých epitopů, z nichž některé jsou sekvenční epitopy a některé jsou strukturní epitopy.Polyklonální protilátky získané imunizací zvířat denaturovanými antigeny jsou směsi protilátek specifických pro jednotlivé epitopy a lze je obecně použít k detekci přirozených struktur nebo denaturovaných cílových proteinů.Vedlejší výhodou použití denaturovaných proteinů jako imunogenů je to, že denaturované proteiny mají tendenci být více imunogenní a mohou stimulovat silnou imunitní odpověď u zvířat.
Expresní systém Escherichia coli se obvykle volí pro antigenní účely, protože je to systém nejnákladnější z hlediska času a peněz.Aby se zlepšila možnost exprese cílového proteinu a pohodlí purifikace, někdy se exprimuje pouze malý fragment cílového proteinu, jako je specifická doména.
Trojrozměrná struktura proteinů
Specifická doména proteinu
Pokud je účelem přípravy protilátky pouze detekce wb, je ekonomické a rychlé použít jako antigen syntetický malý peptid, existuje však riziko slabé imunogenicity nebo neregenity v důsledku nevhodného výběru segmentu peptidu.Protože příprava protilátky vyžaduje dlouhou dobu, jsou často vybrány dva nebo tři různé peptidové segmenty pro přípravu protilátek s použitím polypeptidového antigenu, aby se zajistila úspěšnost experimentu.
Čistota polypeptidového antigenu pro imunizaci musí být vyšší než 80 %.I když vyšší čistotou lze teoreticky získat protilátky s lepší specificitou, v praxi zvířata vždy produkují velké množství nespecifických protilátek a maskují tak výhody čistoty antigenu.
Kromě toho musí být příprava protilátek z malých peptidů zesíťována na vhodný nosičový antigen, aby se zvýšila jeho imunogenicita.Dva běžné antigenní nosiče jsou KLH a BSA.
Čas odeslání: 23. března 2023