Jako vysoce přesný přístroj může HPLC snadno vést k některým nepříjemným malým problémům, pokud není během používání používána správným způsobem.Jedním z nejčastějších problémů je problém s kompresí sloupců.Jak rychle odstranit závadu na chromatografu.Systém HPLC se skládá hlavně ze zásobní láhve, čerpadla, injektoru, kolony, teplotní komory kolony, detektoru a systému zpracování dat.Pro celý systém jsou pilíře, čerpadla a detektory klíčovými součástmi a hlavními místy, která jsou náchylná k problémům.
Klíčem k tlaku v koloně je oblast, které je třeba věnovat zvýšenou pozornost při použití HPLC.Stabilita tlaku na koloně úzce souvisí s tvarem chromatografického píku, účinností kolony, účinností separace a retenčním časem.Stabilita tlaku v koloně neznamená, že hodnota tlaku je stabilní na stabilní hodnotě, ale spíše, že rozsah kolísání tlaku je mezi 345 kPa nebo 50 PSI (umožňuje použití gradientové eluce, když je tlak kolony stabilní a pomalu se mění).Příliš vysoký nebo příliš nízký tlak je problémem s tlakem v koloně.
Nejnáchylnější k selhání a řešení HPLC
1, vysoký tlak je nejčastějším problémem při použití HPLC.To znamená náhlý nárůst tlaku.Obecně existují následující důvody: (1) Obecně je to způsobeno zablokováním průtokového kanálu.V tomto okamžiku bychom to měli prozkoumat po částech.A.Nejprve odřízněte vstup vakuové pumpy.V tomto okamžiku byla zkumavka PEEK naplněna kapalinou, takže zkumavka PEEK byla menší než lahvička s rozpouštědlem, aby se zjistilo, zda kapalina libovolně odkapává.Pokud kapalina nekape nebo nekape pomalu, je hlava filtru rozpouštědla ucpaná.Ošetření: Namočte na půl hodiny do 30% kyseliny dusičné a opláchněte ultračistou vodou.Pokud kapalina kape náhodně, hlava filtru rozpouštědla je normální a je kontrolována;b.Otevřete Purge ventil tak, aby mobilní fáze neprocházela kolonou a pokud nedojde k výraznému snížení tlaku, dojde k zablokování hlavy filtru.Ošetření: Filtrované bílé tečky byly odstraněny a sonikovány 10% isopropanolem po dobu půl hodiny.Za předpokladu, že tlak klesne pod 100 PSI, je filtrovaná bílá hlava normální a je kontrolována;C.Odstraňte výstupní konec kolony, pokud se tlak nesníží, kolona se zablokuje.Ošetření: Pokud se jedná o ucpání pufrem, opláchněte 95%, dokud nebude tlak normální.Pokud je překážka způsobena nějakým více konzervovaným materiálem, měl by být použit silnější průtok než současná mobilní fáze, aby se urychlil k normálnímu tlaku.Pokud se dlouhodobý čistící tlak výše uvedeným způsobem nesníží, lze vstup a výstup kolony považovat naopak za připojený k přístroji a kolonu čistit mobilní fází.V této době, pokud se tlak kolony stále nesníží, lze pouze vyměnit vstupní sítovou desku kolony, ale jakmile není provoz dobrý, snadno to povede ke snížení efektu kolony, proto se snažte používat méně.U obtížných problémů lze zvážit výměnu kolony.
(2) Nesprávné nastavení průtoku: Správný průtok lze resetovat.
(3) Nesprávný poměr průtoku: index viskozity různých poměrů průtoků je odlišný a odpovídající systémový tlak průtoku s vyšší viskozitou je také větší.Pokud je to možné, lze rozpouštědla s nižší viskozitou vyměnit nebo znovu nastavit a připravit.
(4) Posun nuly tlaku v systému: nastavte nulu snímače hladiny kapaliny.
2, tlak je příliš nízký (1) je obvykle způsoben únikem systému.Co dělat: Najděte každé spojení, zejména rozhraní na obou koncích kolony, a utáhněte oblast úniku.Odstraňte sloupek a vhodnou silou utáhněte nebo vyložte PTFE fólii.
(2) Plyn vstupuje do čerpadla, ale tlak je v tuto chvíli obvykle nestabilní, vysoký a nízký.Vážněji, čerpadlo nebude schopno absorbovat tekutinu.Metoda ošetření: otevřete čistící ventil a čistěte při průtoku 3~5ml/min.Pokud ne, vzduchové bubliny byly nasávány u výfukového ventilu pomocí speciální jehlové trubice.
(3) Žádný výtok mobilní fáze: zkontrolujte, zda je v zásobníku mobilní fáze, zda je dřez ponořen v mobilní fázi a zda běží čerpadlo.
(4) Referenční ventil není uzavřen: Referenční ventil je uzavřen po zpomalení.Obvykle klesá na 0,1.~ 0,2 ml/min po uzavření referenčního ventilu.
Souhrn:
V tomto článku jsou analyzovány pouze běžné problémy kapalinové chromatografie.Samozřejmě v naší praktické aplikaci narazíme na více jiných problémů.Při řešení chyb bychom se měli řídit následujícími zásadami: měnit vždy pouze jeden faktor, abychom určili vztah mezi hypotetickým faktorem a problémem;Obecně platí, že při výměně dílů pro odstraňování problémů bychom měli věnovat pozornost vrácení demontovaných neporušených dílů zpět na místo, aby se zabránilo plýtvání;Vytvoření dobrého rekordního návyku je klíčem k úspěchu při řešení chyb.Závěrem, při použití HPLC je důležité věnovat pozornost předúpravě vzorku a správnému provozu a údržbě zařízení.
Čas odeslání: 18. září 2023