V biologickém výzkumu se obvykle používají polypeptidy s dlouhou sekvencí.Pro peptidy s více než 60 aminokyselinami v sekvenci se k jejich získání obecně používá genová exprese a SDS-PAGE.Tato metoda však trvá dlouho a konečný efekt separace produktu není dobrý.
Výzvy a řešení pro syntézu dlouhých peptidů
Při syntéze dlouhých peptidů se vždy potýkáme s problémem, to znamená, že sterická zábrana kondenzační reakce se zvyšuje s rostoucí sekvencí při syntéze a je třeba upravit reakční dobu, aby byla reakce kompletní.Avšak čím delší je reakční doba, tím více vedlejších účinků se vytváří a tvoří se část cílového peptidu.Takové zbytky – deficitní peptidové řetězce jsou klíčovými nečistotami produkovanými při syntéze dlouhých peptidů.Proto při syntéze dlouhého peptidu je klíčovým problémem, který musíme překonat, prozkoumat vysoce kvalitní reakční podmínky a reakční metody, aby byla kondenzační reakce aminokyselin komplexnější a úplnější.Navíc zkraťte reakční dobu, protože čím delší je reakční doba, tím více nekontrolovatelných vedlejších reakcí, tím složitější jsou vedlejší produkty.Proto jsou shrnuty následující tři body:
Mikrovlnnou syntézu lze použít: Pro některé aminokyseliny vyskytující se v procesu syntézy, které není snadné integrovat, lze použít mikrovlnnou syntézu.Tato metoda má pozoruhodné výsledky a značně zkracuje reakční dobu a snižuje tvorbu dvou klíčových vedlejších produktů.
Lze použít metodu syntézy fragmentů: Když je obtížné syntetizovat některé peptidy běžnými metodami syntézy a není snadné je purifikovat, můžeme přijmout úplnou kondenzaci několika aminokyselin v určitém segmentu peptidu do peptidového řetězce jako celku.Tato metoda může také vyřešit mnoho problémů v syntéze.
Může být použita syntéza acylhydrazidů: acylhydrazidová syntéza peptidů je metoda syntézy N-koncového Cys peptidu a C-koncového polypeptidového hydrazidu na pevné fázi chemická selektivní reakce mezi tvorbou amidových vazeb k dosažení metody peptidové vazby.Na základě polohy Cys v peptidovém řetězci tato metoda rozděluje celý peptidový řetězec na více sekvencí a syntetizuje je v daném pořadí.Nakonec se cílový peptid získá kondenzační reakcí v kapalné fázi.Tato metoda nejen výrazně zkracuje dobu syntézy dlouhého peptidu, ale také výrazně zvyšuje čistotu konečného produktu.
Dlouhé čištění peptidů
Specifičnost dlouhých peptidů nevyhnutelně vede ke komplexním složkám surových peptidů.Proto je také výzvou čistit dlouhé peptidy pomocí HPLC.amyloid série procesu čištění polypeptidů, absorbuje mnoho zkušeností a úspěšně se používá při čištění dlouhých peptidů.Přijetím nového vybavení, mícháním více systémů čištění, opakovanou separací a dalšími zkušenými metodami se výrazně zlepšila úspěšnost dlouhého čištění peptidů.
Čas odeslání: 18. dubna 2023